賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500）介紹

一、概述

賽默飛（Thermo Fisher Scientific）旗下的Applied Biosystems 7500型實時熒光定量PCR儀（7500 Real-Time PCR System）是一款高性能的實時熒光定量PCR（qPCR）儀器。它被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原檢測、突變檢測、基因拷貝數(shù)分析等多個分子生物學(xué)研究和臨床檢測領(lǐng)域。7500型PCR儀結(jié)合精確的光學(xué)檢測系統(tǒng)、智能化數(shù)據(jù)分析軟件和穩(wěn)定的溫控系統(tǒng)，可提供高靈敏度和高通量的qPCR檢測，滿足科研、醫(yī)療及工業(yè)實驗室的需求。

二、主要特點

7500型實時熒光定量PCR儀在光學(xué)系統(tǒng)、檢測通道、數(shù)據(jù)分析等方面具有明顯的優(yōu)勢，適用于各種PCR實驗。

1. 高精度光學(xué)檢測系統(tǒng)

• 優(yōu)化的光學(xué)設(shè)計，能夠準(zhǔn)確采集熒光信號，提高檢測靈敏度。

• 支持多種熒光檢測方式，兼容SYBR Green染料和TaqMan探針技術(shù)。

• 快速數(shù)據(jù)采集，提高擴(kuò)增曲線的準(zhǔn)確性，確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

2. 靈活的熒光檢測通道

• 支持5個熒光通道，能夠進(jìn)行多重PCR實驗，檢測多個目標(biāo)基因。

• 兼容多種熒光染料（FAM™、VIC®、ROX™、SYBR® Green等），適用于不同類型的實驗。

3. 精確的溫控系統(tǒng)

• 高效的Peltier熱循環(huán)系統(tǒng)，確保樣品孔間溫度均一性，提高擴(kuò)增的重復(fù)性和可靠性。

• 快速升降溫，縮短實驗時間，提高工作效率。

4. 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件

• Applied Biosystems專用軟件，支持標(biāo)準(zhǔn)曲線分析、相對定量分析（2-ΔΔCt方法）、絕對定量分析等數(shù)據(jù)處理功能。

• 直觀的用戶界面，可自動計算Ct值、熔解曲線分析，支持導(dǎo)出實驗報告。

5. 兼容多種樣本板型

• 支持96孔板，適用于中等通量實驗需求。

• 兼容各種PCR反應(yīng)體系，包括TaqMan探針法、SYBR Green熒光染料法。

6. 可靠的實驗重復(fù)性

• 通過優(yōu)化的檢測和溫控系統(tǒng)，保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性，適用于科研實驗、臨床診斷、環(huán)境檢測等領(lǐng)域。

三、技術(shù)規(guī)格

四、適用領(lǐng)域

1. 基因表達(dá)分析

• 通過實時PCR檢測特定基因的表達(dá)水平，適用于生物醫(yī)學(xué)研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。

• 可使用SYBR Green染料法或TaqMan探針法進(jìn)行高靈敏度的基因表達(dá)定量分析。

2. 病原體檢測

• 7500型PCR儀可檢測細(xì)菌、病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒、HIV等），適用于傳染病檢測。

• 高靈敏度檢測可確保低拷貝病原DNA/RNA的可靠檢測。

3. 突變檢測與基因分型

• 適用于SNP（單核苷酸多態(tài)性）分析、點突變檢測、腫瘤基因突變研究等。

• 結(jié)合TaqMan探針技術(shù)，可實現(xiàn)高特異性的基因分型分析。

4. 司法鑒定與食品安全

• 適用于DNA指紋鑒定、食品安全檢測（如轉(zhuǎn)基因食品檢測）。

• 通過實時PCR技術(shù)，可快速鑒定樣本來源，提高實驗效率。

五、操作流程

7500型PCR儀的使用流程如下：

1. 樣品準(zhǔn)備

• 提取DNA或RNA，進(jìn)行濃度測定和純化。

• 選擇合適的PCR反應(yīng)體系（SYBR Green或TaqMan探針）。

• 配制PCR反應(yīng)液，包括引物、探針、dNTPs、PCR緩沖液、熒光染料或探針。

2. 加樣與PCR板準(zhǔn)備

• 將PCR反應(yīng)體系分裝至96孔PCR板，每孔體積通常為10-50 µL。

• 使用封膜密封PCR板，避免交叉污染。

3. 運行PCR程序

• 在7500 PCR儀的軟件中創(chuàng)建實驗：

• 設(shè)定PCR反應(yīng)條件（變性、退火、延伸）。

• 選擇熒光通道并設(shè)置數(shù)據(jù)采集模式。

• 啟動PCR實驗，實時監(jiān)測熒光信號變化。

4. 數(shù)據(jù)分析

• 通過儀器自帶的軟件分析Ct值，計算基因表達(dá)水平或DNA拷貝數(shù)。

• 生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行數(shù)據(jù)比對。

六、數(shù)據(jù)分析

1. Ct值計算

• **Ct（閾值循環(huán)數(shù)）**表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測閾值，Ct值越低，表示初始DNA/RNA濃度越高。

• 用于基因表達(dá)分析、病原體檢測等實驗。

2. 絕對定量分析

• 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算DNA/RNA拷貝數(shù)，適用于病毒載量檢測等研究。

3. 相對定量分析（ΔΔCt法）

• 比較實驗組和對照組基因表達(dá)水平，廣泛應(yīng)用于藥物研究、癌癥生物標(biāo)志物分析。

七、實驗注意事項

• 確保樣品純度：DNA/RNA質(zhì)量影響擴(kuò)增效率，應(yīng)避免蛋白或其他雜質(zhì)污染。

• 正確設(shè)置熒光通道：不同的熒光探針需要匹配相應(yīng)的檢測通道。

• 避免交叉污染：使用無RNA/DNA酶的移液器和試劑，嚴(yán)格遵循無菌操作流程。

• 優(yōu)化引物設(shè)計：避免二聚體形成，提高PCR特異性和擴(kuò)增效率。

八、總結(jié)

賽默飛7500型實時熒光定量PCR儀憑借高靈敏度的熒光檢測、精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng)、強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，已成為基因組研究、病原檢測、臨床診斷等領(lǐng)域的常見PCR設(shè)備。其多通道檢測、兼容多種熒光探針、支持高通量檢測的特點，使其適用于從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用檢測的各種實驗需求。通過合理優(yōu)化實驗條件，7500型PCR儀能夠提供高精度、穩(wěn)定可靠的PCR定量分析結(jié)果，為科研人員和臨床醫(yī)生提供強(qiáng)有力的實驗支持。